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上海仁捷生物教你ELISA檢測試劑盒常見問題處理

更新時間:2017-08-03      瀏覽次數(shù):1458

ELISA檢測試劑盒常見問題處理
 
出現(xiàn)問題出現(xiàn)問題的原因解決辦法
曲線
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
OD值不正常
 
 
 
 
 
 
 
試劑盒未回溫試劑盒回溫到25℃
溫度控制不好控制正確溫度
孵育時間不準(zhǔn)確控制孵育時間
洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增加洗滌4-5次,每孔250ul,然后拍干
陽光直射,對著風(fēng)直接吹避風(fēng)避光
酶標(biāo)儀的波長錯誤酶標(biāo)儀的波長450nm
抗體的稀釋錯誤正確的稀釋抗體
水質(zhì)問題用娃哈哈礦泉水代替
 
白   板
 
 
洗滌液配制錯誤正確的配制洗滌液
少加液體(抗體、酶標(biāo)記物、A液、B液)正確的步驟加液體
錯加液體 
 
無 梯 度
 
 
標(biāo)準(zhǔn)品也污染換標(biāo)準(zhǔn)品點板
OD值不正常控制溫度時間在做一次
人為點板/
線 性 不 好
 
OD值不正常控制溫度時間在做一次
人為點板/
回  收  率
 
 
 
 
 
 
 
空白管陽性高
 
 
樣本本身就是陽性樣本換陰性樣本做回收率
空白管在實驗中被污染實驗中防止交叉污染
水質(zhì)原因用娃哈哈礦泉水代替
 
 
偏  高
 
 
 
 
添加量不準(zhǔn)確的添加量
添加濃度不適合添加合適的濃度
取液吹干量多準(zhǔn)確的取液吹干
取到其它相層液體取需用相吹干
復(fù)溶液未稀釋或加入量少正確的稀釋復(fù)溶液
 
偏  低
 
 
 
添加量不準(zhǔn)確的添加量
添加濃度不適合添加合適的濃度
取液吹干量少準(zhǔn)確的取液吹干
復(fù)溶液稀釋錯誤或加入量多正確的稀釋復(fù)溶液
 
 
假陰、陽性
 
 
 
 
 
水質(zhì)原因點復(fù)溶液驗證用娃哈哈礦泉水代替
實驗操作原因
 
 
 
吸取到其它相吹干準(zhǔn)確的取液吹干
離心不*延長離心時間
樣本的污染更換樣本
乳化未處理*溫?。?0℃)處理乳化現(xiàn)象
儀器試劑原因
 
離心管未清洗干凈正確的洗滌器具
有機溶劑的影響做試劑空白看影響結(jié)果
衍生化試劑原因(長時間衍生化試劑變質(zhì))更換衍生化試劑
與曲線好壞相關(guān)保證曲線的正常
 
 
金標(biāo)檢測(T)線顏色較淺
 
 
尿液pH偏堿性用0.01M HCl調(diào)節(jié)尿液pH值到7.0左右。
尿樣滴加過多重新測定,尿樣按照說明書,控制在2滴
尿液過于混濁將尿液離心后,取上清液重新測定
 
 
金標(biāo)質(zhì)控(C)線不出現(xiàn)
 
 
 
 
 
 
檢測卡由于高溫、受潮等原因失效尿樣需要重新檢測。
過了有效期失效。該批號的金標(biāo)應(yīng)丟棄處理,尿液需要重新檢測
 
操作過程中檢測卡沒有平放,導(dǎo)致液體樣品直接沖過檢測區(qū)尿樣需要重新檢測,且檢測卡平放于桌面上再加樣。
尿液樣品中含有較高的抑制或者干擾抗原抗體反應(yīng)的物質(zhì)(比如明礬、小蘇打、氧化劑、肌酐等)該尿液的檢測結(jié)果無效
金標(biāo)卡上在除了T和C線之外的其他地方出線金標(biāo)卡上的劃痕;膠體金在跑板過程中沒有*跑干凈而在卡上的痕跡;該檢測卡結(jié)果不可信,尿液需要重新檢測。
實驗重復(fù)性不好操作人員的不一致,取樣的不一致,樣本數(shù)量的多少,加樣時間的長短,洗滌條件不一致,加樣量不一致盡量保持的實驗一致性
 
分析軟件的使用
 
不能設(shè)置和保存正確的設(shè)置和保存
如何判斷曲線的好壞和分析結(jié)果正確的判斷曲線的好壞和分析結(jié)果
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